上海晶抗生物為您詳細介紹人Secretinelisa試劑盒操作步驟如下
操作步驟：
1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔
的盡量做復孔。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50u于反應孔內(nèi)。立即加入50ul標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37C溫育
45分鐘。
4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37°C溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37°C溫育5分鐘。避免光照。
8、取出酶標板，迅速加入50u終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
操作注意事項：
1、試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
7、加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
一般來講，96T能檢測90個樣本，48T能檢測42個樣本，這里面需要用標樣來做標準曲線，所以各位需要做實驗的老師們，請在購買ELISA試劑盒的時候注意，需要做多少個樣本，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費！
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