由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原，因此免疫測定的應用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：
1) 體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。
5．標記的免疫測定
如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml，但在臨床檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和中，ELISA試劑盒標記物分別為放射性核素和酶，zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數百至數千倍。在標記免疫測定中，一般加入過量的標記試劑以保證與待測物*反應。以標記抗體（Ab ※）檢測抗原（Ag）為例，反應式如下：
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反應產物中有與Ag結合的Ab※和游離和Ab※ ，如不將兩者分離而測定標記物，測得的結果將為兩者之和。因此，游離標記物與結合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟。可采用多種手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標記的抗原或抗體直接反應，結合的標記物被固定在載體上，而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab※除去，結合標記物的測定可在固相上進行。IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測定，對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值。
1.3 抗原抗體反應
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態平衡，其反應式為：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結合力，可以用平衡常數K表示：
K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
高親和力抗體的抗原結合點與抗原的決定簇在空間構型上非常適合，兩者結合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結構和活性，ELISA試劑盒因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應用于免疫測定中可得到更好的效果。
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